Quais as etapas para produção de uma proteína recombinante em bactéria?

Quais as etapas para produção de uma proteína recombinante em bactéria?

As etapas principais para a produção de uma proteína recombinante compreendem: (1) pesca do gene de interesse, (2) escolha do sistema de expressão, (3) clonagem, e (4) expressão.

O que é expressão de proteína?

Técnica bioquímica utilizada para determinar a quantidade relativa e o peso molecular de uma proteína dentro de uma mistura de proteínas ou outras moléculas.

O que é a expressão de proteínas heterólogas?

No sistema de produção acima mencionado ocorre a expressão de uma proteína que é heteróloga para o microrganismo produtor e homóloga à proteína expressa pelo ser humano, que é o doador do gene introduzido na bactéria.

Como funciona o sistema de expressão em fagos?

Ocorre uma expressão ordenada de síntese macromolecular dirigida pelo fago, tal como se vê em infecções por vírus animais. Os primeiros RNAm codificam para as primeiras proteínas que são necessárias para a síntese de DNA do fago e para desligar o DNA, o RNA e a biossíntese protéica do hospedeiro.

Quais métodos biotecnológicos podem ser utilizados para a produção de proteínas?

Um método típico na biotecnologia aplicado na produção de proteínas recombinantes é a clonagem molecular, cujo princípio é montar moléculas de DNA recombinantes/quimérico, ou seja, uma molécula de DNA composta por fragmentos de informação genética de organismos (fontes) variados.

Como ocorre a inserção do DNA recombinante na bactéria?

A seguir o plasmídio clivado é misturado com os fragmentos de DNA (contendo o gene) e uma enzima chamada ligase “cola” os fragmentos ao plasmídio, produzindo o chamado DNA recombinante. Isso feito, o DNA recombinante é introduzido em uma bactéria hospedeira.

Como ocorre a expressão do DNA?

Durante a expressão de um gene codificante de proteína, a informação flui do DNA→ RNA→ PROTEÍNA. Esse fluxo direcional de informação é conhecido como o dogma central da biologia molecular, e o processo de ir de um DNA para um produto funcional, é conhecido como expressão gênica.

O que é expressão gênica quais as suas etapas?

Esse processo envolve dois passos principais: a transcrição e a tradução. Na transcrição, a sequência de DNA de um gene é copiada para fazer uma molécula de RNA. Essa etapa é chamada de transcrição pois envolve reescrever, ou transcrever, a sequência de DNA num "alfabeto" similar de RNA.

O que é a tecnologia de DNA recombinante?

A clonagem molecular é uma técnica da engenharia genética conhecida também por DNA recombinante, clonagem gênica ou manipulação gênica. Essa tecnologia permite pegar um “pedaço” do DNA e combiná-lo com outro, produzindo muitas cópias de diferentes combinações genéticas.

O que são vetores em biotecnologia?

Os vetores de expressão são vetores de clonagem que possuem todos os elementos genéticos que permitem a expressão de proteínas recombinantes. Se os elementos genéticos permitem a expressão em células bacterianas, este é um vetor de expressão procarioto.

Quais são os genes de interesse para a produção de proteínas recombinantes?

• Clonagem de genes de interesse para expressão e produção de proteínas recombinantes: insulina, hormônio de crescimento  genes de humanos clonados em bactérias; Plantas transgênicas; Animais transgênicos. PCR; Bibliotecas genômicas; Vetores; Sequenciamento de DNA; Hibridização; Eletroforese.

Quais são as enzimas de restrição do DNA?

• Os pesquisadores “recortam” (utilizando enzimas de restrição), do DNA humano, o gene de interesse. Esse fragmento de DNA contendo o gene é multiplicado por PCR para obtermos várias cópias do mesmo fragmento (ou da mesma informação).

Como é feito o recombinante da bactéria hospedeira?

• Isso feito, o DNA recombinante é introduzido em uma bactéria hospedeira. A bactéria hospedeira é colocada em um meio nutritivo seletivo, apenas aquelas que possuem o DNA recombinante crescem, formando colônias.