Como é feita a clonagem gênica?

Como é feita a clonagem gênica?

Num experimento típico de clonagem, um gene alvo é inserido num pedaço circular de DNA chamado do plasmídeo. O plasmídeo é introduzido em bactérias através de um processo chamado transformação, e bactérias portadoras do plasmídeo são selecionadas utilizando-se antibióticos.

Quais são os objetivos da clonagem molecular?

A clonagem molecular é o processo de construção de moléculas de DNA recombinante e da sua propagação em hospedeiros apropriados que possibilitam a selecção do DNA recombinante. Esta tecnologia permite estudar os genes e os seus produtos, obter organismos transgénicos e realizar terapia génica.

Que estratégias para confirmação de clonagem?

Para confirmação da Page 7 2 clonagem, é possível utilizar reação de restrição enzimática, PCR ou sequenciamento. − O inserto é recuperado do vetor de clonagem por restrição enzimática e ligado ao vetor de expressão escolhido. O vetor também deve ser previamente preparado para a ligação.

O que é um DNA recombinante e como ele é feito?

São moléculas de DNA produzidas a partir da combinação de sequências de DNA proveniente de diferente fontes. A técnica central da metodologia do DNA recombinante é a clonagem molecular. A tecnologia do DNA recombinante é um conjunto de técnicas que permitem a manipulação do DNA.

Como saber se a clonagem deu certo?

Triagem azul-branca. Para facilitar a visualização e saber se a ligação (plasmídeo + inserto) deu certo ou não, usamos essa mudança de cor nas colônias para fazer a triagem. Dois tipos de colônias podem se formar: Colônias brancas: bactérias em que os plasmídeos contendo o inserto estão presentes.

Como se constrói um vetor de clonagem?

Um vector de clonagem deve apresentar uma sequência que permite a sua replicação no interior de uma célula hospedeira bacteriana (leveduras, no caso dos YAC's). Deve apresentar um local de clonagem, isto é, um local para inserir o DNA alvo.

Por que as enzimas de restrição são importantes para a engenharia genética?

As enzimas de restrição ou também denominadas de endonucleases de restrição, são as ferramentas básicas da engenharia genética, desempenhando função de clivagem (corte) da molécula de DNA em pontos específicos, em reconhecimento a determinadas seqüências de nucleotídeos.

Quais são as etapas da clonagem molecular?

• Principais etapas da clonagem molecular (2) Amplificação Isolamento de clones de DNA recombinante Especificação das etapas da clonagem molecular

Como fazer a clonagem?

• Essa tecnologia permite pegar um “pedaço” do DNA e combiná-lo com outro, produzindo muitas cópias de diferentes combinações genéticas. Quando usamos a palavra clonagem é muito comum realizar a associação com o clone de um organismo inteiro, como o caso da ovelha Dolly.

Qual a aplicação da clonagem de DNA?

• Aplicação da clonagem de DNA. A clonagem molecular possui inúmeras aplicações e vem ganhando cada vez mais importância nos últimos anos. Entre as possibilidades estão o desenvolvimento de proteínas recombinantes mais seguras para o tratamento de doenças, o aprimoramento da terapia genética, a produção vacinas, além do uso na ...

Qual a problemática da clonagem?

• Assim como o uso de organismos geneticamente modificados ou transgênicos, a clonagem levanta inúmeras questões e preocupações éticas e sociais. Para muitos bioeticistas, a questão mais problemática é a utilização da técnica para melhoramento de indivíduos.